深圳艾瑞斯多西環(huán)素檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、雞蛋等樣本中的多xi環(huán)素藥物（Doxycycline，DOX），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含多xi環(huán)素藥物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中多xi環(huán)素藥物的殘留量。

深圳艾瑞斯多西環(huán)素檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min

2.3 檢測下限：

組織、肝臟、雞蛋…………………2ppb

蜂蜜…………………………………2ppb

尿樣………………………………0.5ppb

牛奶………………………………2.5ppb

奶粉…………………………………4ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

多西環(huán)素……………………………100%

四環(huán)素………………………………143%

金mei素………………………………15%

土mei素………………………………15%

2.5 樣本回收率：

組織…………………………85±20%

肝臟、雞蛋…………………75±20%

蜂蜜…………………………85±20%

尿樣…………………………80±20%

牛奶、奶粉…………………75±20%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板………………………96孔

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液1瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高標(biāo)準(zhǔn)液有揮發(fā)性，需注意密封）

標(biāo)準(zhǔn)品溶液0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

酶標(biāo)記物（紅蓋）……………………11ml

抗體工作液（藍(lán)蓋）…………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

5×復(fù)溶液（黃蓋） …………………50ml

說明書…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個

酶聯(lián)免疫試驗步驟

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實驗開始前需配制標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液；低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

在0ppb的瓶中加復(fù)溶液3ml，0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb的瓶中分別加復(fù)溶液2ml，4.05ppb的瓶中加復(fù)溶液3ml。

標(biāo)準(zhǔn)液6：取1.0ppm高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液12ul加入裝有3ml 復(fù)溶液4.05ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為4.05ppb。

標(biāo)準(zhǔn)液5：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液6加入裝有2ml 復(fù)溶液1.35ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為1.35ppb。

標(biāo)準(zhǔn)液4：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液5加入裝有2ml 復(fù)溶液0.45ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.45ppb。

標(biāo)準(zhǔn)液3：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液4加入裝有2ml 復(fù)溶液0.15ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.15ppb。

標(biāo)準(zhǔn)液2：取1ml標(biāo)準(zhǔn)液3加入裝有2ml 復(fù)溶液0.05ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.05ppb。

標(biāo)準(zhǔn)液1：直接使用復(fù)溶液，濃度即為0ppb。

6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，一次拍干。（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100μl/孔，37℃避光反應(yīng)30分鐘。

6.5 洗    滌：同上

6.6 顯    色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時間）。

6.7 終    止：加終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。