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RAW264.7誘導(dǎo)破骨細(xì)胞套裝

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詳細(xì)介紹

一.產(chǎn)品簡(jiǎn)介
CTCC自主研發(fā)的非原代破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(貨號(hào):CTCC-Y005),體外誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7向破骨方向分化。該培養(yǎng)基包括促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞向破骨方向分化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清,細(xì)胞因子以及青鏈霉素。
二.包裝組成成分
 
培養(yǎng)基名稱
規(guī)格
保存方式
有效期
非原代破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基
100ml
避光,4℃
1個(gè)月
Raw264.7
T-25
 
 
TRAP染色試劑盒
50T
避光,4℃
3個(gè)月
 
三.破骨誘導(dǎo)分化操作規(guī)程:
  1. 小鼠的單核/巨噬細(xì)胞系RAW264.7用含10%FBS的DMEM 高糖培養(yǎng)基于37℃,5% CO2培養(yǎng),其中含1%青鏈霉素。
  2. 使用37℃預(yù)熱的破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照5000~20000 cells/cm2密度進(jìn)行鋪板,48孔板培養(yǎng)基體積建議400-500μL。
  3. 細(xì)胞每隔1d全量換液一次,每次換液前破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基應(yīng)37℃預(yù)熱。
  4. 誘導(dǎo)分化4-10天,可觀察到成熟的多核破骨細(xì)胞。
四.trap染色操作規(guī)程:細(xì)胞樣本(以48孔板為例)
  1. 移除細(xì)胞培養(yǎng)液,每孔加入400μL 1號(hào)洗滌液清洗,棄液;
  2. 每孔加入300μL固定液,室溫固定15-30min,棄液;
  3. 每孔加入300μL 2號(hào)洗滌液,清洗2次;
  4. 染色:每孔加入150-200μL TRAP染色液,37℃避光孵育10-15min(待測(cè)樣品中酒石酸酸性磷酸酶活性較低時(shí),可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間至30分鐘或顯微鏡下顯色至預(yù)期深淺)。
  5. 每孔加入300μL 2號(hào)洗滌液,清洗2次;
  6. 顯微鏡下觀察和拍照;
  7. 每孔加入300μL保存液,4℃放置,可保存一周。
五.注意事項(xiàng)
  1. RAW264.7細(xì)胞分化程度過(guò)高,即未誘導(dǎo)時(shí)伸出偽足的細(xì)胞比例過(guò)高
  2. 接種密度不恰當(dāng)
  3. 長(zhǎng)時(shí)間在培養(yǎng)箱外觀察
  4. 實(shí)驗(yàn)時(shí)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基未預(yù)熱
  5. 換液未按照上述規(guī)程操作
  6. 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基保存失當(dāng),反復(fù)溫浴和冷藏交替
 
???????六.結(jié)果展示

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