腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源最豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過(guò)75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過(guò)程中發(fā)射藍(lán)色光，峰值發(fā)射波長(zhǎng)約為450~480 nm。

腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時(shí)釋放出CO2和藍(lán)色熒光（~466 nm）（圖1）。其具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1）能檢測(cè)較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100μM）；2）樣品無(wú)自體熒光，背景熒光較低，盡管信號(hào)較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，能夠進(jìn)行數(shù)小時(shí)至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測(cè)。

圖1. 腔腸素作為水母發(fā)光蛋白輔助因子的Ca2+依賴反應(yīng)流程

腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍(lán)光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強(qiáng)的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530 nm）。通過(guò)Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號(hào)可通過(guò)比較綠光和藍(lán)光的量來(lái)進(jìn)行測(cè)定，消減了因細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞類型和其他實(shí)驗(yàn)變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

主要應(yīng)用

1. 活體成像。

2. 報(bào)告基因檢測(cè)。

3. 檢測(cè)細(xì)胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細(xì)胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子能夠增強(qiáng)腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

4. 高通量篩選。

5. 監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。

產(chǎn)品描述

腔腸素f（Coelenterazine f）系天然腔腸素衍生物，是水母發(fā)光蛋白的底物。腔腸素f與天然腔腸素結(jié)構(gòu)上的差別在于氟（F）原子替換R-1位酚基上的羥基。腔腸素f和水母蛋白被氧化后活化，生成腔腸素的亞穩(wěn)態(tài)復(fù)合物。該復(fù)合物生成時(shí)間非常短，而天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物的生成反應(yīng)很慢（60 min內(nèi)僅有40%的天然腔腸素完成反應(yīng)）。與天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物產(chǎn)生的光子總數(shù)相比，此復(fù)合物僅產(chǎn)生80%的光子能。

腔腸素f與Ca2+接觸時(shí)，可快速且高產(chǎn)量的發(fā)光，產(chǎn)能強(qiáng)度是天然腔腸素的20倍。同時(shí)，腔腸素f具有最好的細(xì)胞滲透性。當(dāng)需要極高的Ca2+檢測(cè)靈敏度來(lái)研究水母蛋白再生實(shí)驗(yàn)時(shí)，推薦使用本底物。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。

腔腸素f工作液的配制

腔腸素f溶解：不溶于水。目前毒性最低的溶劑是100%乙醇，可配制濃度為0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性緩沖液（堿性pH會(huì)快速降解底物）稀釋成低濃度工作液。切忌溶于DMSO。

腔腸素f保存：建議溶液現(xiàn)配現(xiàn)用！體外實(shí)驗(yàn)，需將稀釋后的工作液室溫放置20-30 min，方可穩(wěn)定工作。該工作液可室溫穩(wěn)定放置3-4 h，有非常微弱的信號(hào)衰減發(fā)生。不建議儲(chǔ)存液-20℃或更低溫度保存，因?yàn)槠涓吣芰康亩醐h(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會(huì)發(fā)生降解，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)酢６虝r(shí)間保存條件：-70℃避光保存于塑料管內(nèi)（溶液中不含有Ca2+），且有惰性氣體保護(hù)。

注意事項(xiàng)

1.粉末最好使用惰性氣體（氮?dú)饣驓鍤猓?strong>在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，長(zhǎng)期保存于-70℃。管內(nèi)即使存在少量空氣，可能造成腔腸素n氧化失活，造成在不同試驗(yàn)間的量化分析結(jié)果無(wú)法比較。

2.本品接觸空氣，水或者任何氧化試劑會(huì)不穩(wěn)定。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

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HB181121