產(chǎn)品描述

Alkaline Phosphatase，中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除，常用于阻止載體的自連作用：在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在，載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端無(wú)磷酸基團(tuán)，因而不可以和自身3’ 端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板。

本品為蝦來(lái)源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。該酶作用于末端去磷酸化，無(wú)論末端為粘端，還是平端。SAP 也可以用來(lái)降解PCR 反應(yīng)中的dNTP，用于后續(xù)測(cè)序和SNP分析。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期3年。

注意事項(xiàng)

1）1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0)，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2，25℃溫育。

2）熱失活：65℃加熱5分鐘，不可逆失活。當(dāng)完成去磷酸化反應(yīng)后，無(wú)需純化產(chǎn)物，可以直接用于后續(xù)連接反應(yīng)。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4) 本產(chǎn)品僅作科研用途!

使用方法

DNA去磷酸化

① 在EP管中加入下列試劑*：

【*】可根據(jù)比例相應(yīng)放大反應(yīng)體系。

【**】1 pmol DNA片段量約相當(dāng)于1 ug 3kb大小的質(zhì)粒。

② 混勻上述試劑，于25℃孵育30 min。

③ 將EP管65℃，5 min溫浴，終止反應(yīng)。

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HB220114